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RNA探針(antlsense probe)
更新時間:2015-07-24   點擊次數(shù):1472次


    通過改變外源cDNA在質(zhì)粒中的插入方向或選用不同的RNA聚合酶,可以控制RNA的轉(zhuǎn)錄方向(即以cDNA的哪條鏈為模板轉(zhuǎn)錄RNA),從而可以得到與mRNA同序列的同義RNA探針(senseprobe)或與mRNA互補的反義RNA探針(antlsense probe),后者即互補RNA(cRNA)探針。通常用同義RNA探針作cRNA探針的陰性對照。ELISA試劑盒
 
    由于在體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)物中可提供有標記物標記的核苷酸為原料.因此經(jīng)過體外轉(zhuǎn)錄就能得到標記的cRNA探針。ceRNA探針是單鏈探針,故以cRNA探針進行雜交反應(yīng)可避免應(yīng)用雙鏈cDNA探針作雜交反應(yīng)時存在的兩條鏈之間的復性問題。cRNA和mRNA之間形成的雜交體要比cDNA-mRNA雜交體穩(wěn)定.因此雜交反應(yīng)后可經(jīng)受高嚴格度洗滌。cRNA -mRNA雜交體不受RNA酶的影響,故雜交后還可用RNA酶處理,以除去未結(jié)合的探針。此外,體外轉(zhuǎn)錄合成的cRNA探針的長度比較一致。ELISA試劑盒

    由于cRNA探針具有以上優(yōu)點,因此在分子雜交中,特別是在原位雜交中的應(yīng)用較廣泛。但cRNA探針的制備過程較復雜,需要較高的分子生物學實驗條件,cRNA對RNA酶敏感,易被RNA酶破壞,因而在操作過程中需嚴格防止RNA酶污染。ELISA試劑盒

 

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